《Hybrid paper/PDMS microfluidic device integrated with RNA extraction and recombinase polymerase amplification for detection of norovirus in foods》

期刊名稱：《Applied and Environmental Microbiology》

影響因子：3.9

研究團隊：麥吉爾大學戴維斯夫人研究所病毒性疾病中心

諾如病毒（(HuNoV)）屬於杯狀病毒科，可通過受污染的食物傳播，是引起急性胃腸炎的主要原因。

實驗方法

纖維素紙條吸收了MNV-1 RNA，隨後將其釋放到MIRA試劑中，RNA首先被逆轉錄成互補DNA（cDNA），然後擴增成雙鏈DNA（dsDNA），接着探針與目標序列進行了特異性的結合，鹼性四氫呋喃（THF）殘基被內切酶IV裂解，使鏈被聚合酶延伸。擴增子被捕獲，在T線上產生視覺信號。

實驗開發成果

課題組開發了一種摺疊的紙/PDMS微流控裝置，該裝置結合了核酸提取、等溫核酸擴增、可視化檢測多種功能，可以無縫集成從樣品製備到MNV-1的終點檢測。

該微流控裝置在35 min範圍內完成檢測，檢測限均為200 PFU/mL。並且每個微流控設備的成本計算為6.76美元，為課題組目前已知的所有檢測方法中最便宜的。

實驗價值

課題組進一步評估了這種微流控裝置在萵苣和覆盆子中檢測MNV-1的性能，將粗MNV-1 RNA提取物引入新鮮農產品樣品中，不需要複雜的病毒RNA濃度和純化步驟，在生菜中檢測到170 PFU/g、在樹莓中檢測到230 PFU/g。

而傳統的檢測食品中病毒的分子分析方法，如PCR和qPCR需要高純度的病毒顆粒，這使病毒從食品基質中的洗脫、濃度和純化變得複雜。並且傳統方法需要複雜、笨重和昂貴的設備，不適合在資源有限的環境中使用。

該裝置在快速檢測食品供應鏈中的HuNoV和其他食源性病毒方面具有重要價值。