人巨細胞病毒（HCMV）是皰疹病毒雙耳皰疹病毒亞科的一員，主要傳播途徑是來自對嬰兒呈HCMV血清陽性的母親母乳。早產兒以及極低出生體重的嬰兒，由於其免疫系統不成熟和缺乏來自母親的保護性抗體，可能會遭受HCMV感染的嚴重後果。但母乳是嬰兒推薦的營養來源，它也被認為是對早產兒的治療方法。為了防止早產兒母乳獲得性巨細胞病毒感染，確保VLBW嬰兒儘快獲得安全的母乳，一種快速、經濟、簡單的方法在母乳中進行HCMV檢測對於預防獲得性HCMV感染是至關重要和必要的。

中國醫科大學法醫學學院的姚軍教授的課題組在《Frontiers in cellular and infection microbiology》期刊上發表文章《Rapid detection of human cytomegalovirus by multienzyme isothermal rapid amplification and lateral flow dipsticks》，影響因子4.6。研究採用多酶恆溫快速核酸擴增技術MIRA和側流色譜帶LFD相結合，構建了一種有效的HCMV檢測技術。在37°C恆溫環境下，整個反應可以在12分鐘內完成，10分鐘後可以明顯觀察到LFD顯色結果，且該方法的檢測靈敏度達到50copies/μl。檢測母乳樣本，將MIRA-LFD方法和常規qPCR做對比，MIRA-LFD的準確率為100%。

研究概述

課題組開發了一種快速、有效、經濟的HCMV檢測方法可以預防早產兒獲得性巨細胞病毒感染。課題組將MIRA與LFD結合起來，創造了一種新的HCMV檢測方法，適用於家庭檢測。

將母乳樣本渦旋離心後，使用DNA快速釋放劑從母乳樣品中提取HCMV DNA。整個MIRA擴增反應可以在37°C恆溫環境下經過12分鐘完成。接着稀釋產物，用LFD條帶顯色，10 min後可觀察結果。

實驗中使用了bbin宝盈(中国)生物的DNA恆溫快速擴增試劑盒（膠體金檢測條型）（產品貨號：WLB8203KIT）、DNA恆溫快速擴增試劑盒（基礎型）（產品貨號：WLB8201KIT）。

這種方法不需要精密的儀器或熟練的操作人員，可應用於醫療資源有限的區域或家庭，以減少早產兒HCMV感染引起的嚴重疾病，也可以使得早產兒、低體重兒早日開始母乳餵養。

實驗結果

將HCMV質粒DNA連續稀釋10倍，從5×10⁶copies/μl稀釋到5copies/μl，然後使用MIRA-LFD檢測樣本。條帶可以識別濃度低至50copies/μl的質粒DNA。並且觀察到水和人類基因組模板沒有擴增片段。

上圖為使用MIRA-LFD檢測HCMV質粒樣本。1：水模板；2：人類基因組模板；3：5×10⁶copies/μl模板；4：5×10⁵copies/μl模板；5：5×10⁴copies/μl模板；6：5×10³copies/μl模板；7：5×10²copies/μl模板；8：5×10¹copies/μl模板。9:5copies/μl模板。

課題組使用qPCR對質粒一樣地進行了10倍連續稀釋的分析，從5×10⁶copies/μl到5copies/μl，檢測限為5×10³copies/μl。結果表明，MIRA-LFD對HCMV的檢測靈敏度高於qPCR。

上圖為用qPCR方法檢測HCMV質粒樣本。1：5×10⁶copies/μl模板，2：5×10⁵copies/μl模板，3：5×10⁴copies/μl模板，4：5×10³copies/μl模板，5：5×10²copies/μl模板，6：5×10¹copies/μl模板，7：5copies/μl模板，8：水模板。